肝X受体在Behcet病和Vogt-小柳原田综合征发病中作用的研究

【摘要】背景葡萄膜炎是一组累及葡萄膜、玻璃体、视网膜和视网膜血管的炎症，也被称为眼内炎症。由于葡萄膜炎的发病部位或累及组织不同，在临床上类型众多。如根据病因可分为感染性、外伤性、自身免疫性葡萄膜炎等，根据炎症所在位置可分为前、中间、后及全葡萄膜炎，而根据与全身性疾病的关联又可分为Fuchs综合征、Behcet病（Behcet’sdisease，BD）、Vogt-小柳原田综合征（Vogt-Koyanagi-Haradasyndrome，VKH）等。Behcet病是一种以葡萄膜炎、多形性皮肤损害、口腔溃疡、生殖器溃疡等为特征的多器官、多系统受累的疾病。Vogt-小柳原田病也是一种累及全身多个系统的炎症性疾病，主要表现为脉络膜炎、脉络膜视网膜炎、视乳头炎、神经视网膜炎和肉芽肿性全葡萄膜炎，常伴有皮肤和毛发改变、听觉功能障碍、脑膜刺激征等全身性表现。该两种疾病所致的葡萄膜炎均受累组织广泛、发作频繁、治疗困难、预后差，属葡萄膜炎中处理最为棘手的类型范畴，也属我国葡萄膜炎中常见类型范畴[1]。它们的病因和发病机制均尚不完全清楚，目前有细菌感染学说、病毒感染学说、自身免疫学说等多种学说。自身免疫学说是目前广为人们所接受的一种学说，研究较多也较明确的自身免疫因素便是CD4+T细胞包括Th17、Th1、Treg细胞，及一些炎症因子包括IL-17、IFN-γ、IL-10等[2-11]。肝X受体（liverXreceptor,LXR）是核受体的一种，对其功能的报道早年主要是关于脂质代谢方面[12]，近期越来越多的研究发现其在炎症及免疫调节上有重要的作用，如对CD4+T细胞及多种炎症因子有调节作用[13-15]。肝X受体活化的激动剂有内源性氧化胆固醇衍生物包括22（R）-羟固醇、24（S）-羟固醇、27-羟固醇等，和合成激动剂如T0901317、GW3965[16-20]。因此我们进行以下实验：1.肝X受体在Behcet病患者中表达水平的研究；2.肝X受体在Vogt-小柳原田综合征患者中表达水平的研究；3.GW3965对CD4+T细胞功能的影响及其机制的研究。从而研究肝X受体会不会是引起Behcet病或Vogt-小柳原田病发病的重要因素，为这类难治、易复发的棘手疾病的治疗提供新的方向和思路。第一部分肝X受体在Behcet病患者中表达水平的研究目的：研究肝X受体在Behcet病患者中的表达水平及其与疾病活动性的相关性。方法：将从正常人和Behcet病患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）静脉新鲜抽取的外周血进行密度梯度离心，以分离外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs）。提取PBMCs的总RNA并反转录成cDNA，用实时荧光定量PCR（Polymerasechainreaction）（RT-qPCR）的方法检测PBMCs中LXR的表达。对分离出的PBMCs使用人CD4+T细胞磁珠进行细胞分选，收集CD4+T细胞。用流式细胞技术检测正常人及病人CD4+T细胞中LXR的表达。结果：1.活动期Behcet病患者LXRβ在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均显著低于正常人。2.静止期Behcet病患者LXRβ在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无明显差异。3.Behcet病患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）LXRα在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无明显差异。结论：我们的研究表明：Behcet病葡萄膜炎患者PBMCs中LXRβ的mRNA的表达低于正常对照，纯化的CD4+T细胞中LXRβ的蛋白的表达亦低于正常对照。说明与正常人相比，LXRβ的表达在BD病人中存在差异，提示与疾病存在相关性。另一亚型LXRα在PBMCs与CD4+T细胞水平均无改变。LXR的表达只在眼部炎症活动期的葡萄膜炎患者中降低，而在静止期则不然，表明其与该病的疾病发展存在某种关联。第二部分肝X受体在Vogt-小柳原田综合征患者中表达水平的研究目的：研究肝X受体在Vogt-小柳原田综合征患者中的表达水平及其与疾病活动性的相关性。方法：将从正常人和Vogt-小柳原田综合征患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）静脉新鲜抽取的外周血进行密度梯度离心，以分离PBMCs。用人CD4+T细胞磁珠进行细胞分选，收集CD4+T细胞。用RT-PCR和流式细胞技术检测LXR的表达。结果：1.活动期Vogt-小柳原田综合征患者LXRβ在PBMCs中mRNA水平的表达显著低于正常人，静止期患者的表达则无明显差异。2.活动期和静止期的Vogt-小柳原田综合征患者LXRβ在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无显著差异。3.Vogt-小柳原田综合征患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）LXRα在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无明显差异。结论：第一部分和第二部分的结果表明：Behcet病和Vogt-小柳原田综合征患者PBMCs中LXRβ的mRNA的表达均低于正常对照，提示与疾病存在相关性。Behcet病患者中纯化的CD4+T细胞中LXRβ蛋白的表达亦低于正常对照，而Vogt-小柳原田综合征患者则与正常无差异，分析可能是PBMCs中LXRβ的低表达主要不存在于CD4+T细胞中而是PBMC中的其他种类细胞。第三部分GW3965对CD4+T细胞功能的影响及其机制的研究目的：肝X受体在免疫调节中的作用尚不完全清楚。本部分研究探讨LXR对CD4+T细胞的作用及其可能的机制，从而明确LXR在BD和VKH疾病发病中的作用。方法：将从正常人和患者（包括活动期Behcet病和活动期Vogt-小柳原田综合征患者）静脉新鲜抽取的外周血进行密度梯度离心，以分离PBMCs。用人CD4+T细胞磁珠进行细胞分选，收集CD4+T细胞。用流式细胞技术和ELISA（enzyme-linkedimmunosorbentassay，酶联免疫吸附试验）的方法检测LXR对CD4+T细胞功能的影响。用RT-PCR和流式细胞技术研究LXR激动剂GW3965对CD4+T细胞作用的机制。结果：1.GW3965抑制CD4+T细胞对IL-17、IFN-γ的分泌，对IL-10的产生无影响。2.GW3965降低IL-17+、IFN-γ+和IL-17IFN-γ双阳Th细胞占CD4+T细胞的百分比，对Treg细胞的百分比无影响。3.GW3965抑制转录因子RORC和T-bet在mRNA水平的表达。4.GW3965抑制CD4+T细胞的增殖，对CD4+T细胞的凋亡无明显影响。5.在刺激30min时，GW3965显著地降低CD4+T细胞中Nfκ（bNuclearFactorκB，核因子κB）p65(pS529)的磷酸化水平。6.肝X受体的活化伴有载脂蛋白E（apolipoproteinE，ApoE）在mRNA水平表达的上调。结论：结果表明，GW3965可能通过影响转录因子的表达、Nfκb炎症信号通路等机制发挥对CD4+T细胞功能的影响，包括各类效应细胞的百分比、细胞因子的分泌、增殖、凋亡等。提示LXR的活化可通过抑制Th1和Th17细胞的效应来发挥对异常免疫反应进行调节的作用。
【作者】吴丽丽；
【导师】杨培增；
【作者基本信息】重庆医科大学，眼科学，2014，博士
【关键词】Behcet病；Vogt-小柳原田综合征；肝X受体；Th17细胞；Th1细胞；

【参考文献】
[1]柴金伶.基于植气温差的小麦水分状况监测研究[D].南京农业大学,作物栽培学与耕作学,2011,硕士.
[2]刘哲.1%吡美莫司乳膏对白癜风豚鼠模型皮损区HMB45、TNF-α和IL-4表达的影响[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[3]葛云芳.运动编辑及其在虚拟环境中的应用[D].浙江大学,计算机应用,2004,硕士.
[4]辛巧荣.高中生地理空间能力培养策略研究[D].西北师范大学,教育,2013,硕士.
[5]易华.从行政型治理到经济型治理[D].湖南师范大学,政治经济学,2004,硕士.
[6]赵洁.生态翻译学视角下的《红楼梦》英译本研究[D].广西师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[7]邵眺眺.美国“337条款”分析与我国企业的应对之策[D].扬州大学,民商法学,2012,硕士.
[8]廖红娟.基于WebGIS的城市商业网点信息采集研究[D].华东师范大学,2005.
[9]苏文崎.新型罗丹明类荧光探针的合成及对金属离子的选择性识别研究[D].西北大学,有机化学,2013,硕士.
[10]朱珊.农民集中居住前后福利变化研究[D].华中农业大学,土地资源管理,2014,硕士.
[11]朱振刚.论西方传教士的国家背景[D].中国艺术研究院,艺术学,2013,硕士.
[12]李舒亮.建设项目的风险管理效率研究[D].哈尔滨工业大学,2006.
[13]孙婧.论网络视频对中国纪录片发展的影响[D].辽宁大学,新闻学,2012,硕士.
[14]汪洋.非解析复变电力系统电压稳定分析的动态等值原理研究[D].湖南大学,电气工程,2011,硕士.
[15]林翔.基于多层结构的管理信息系统的实现[D].广东工业大学,软件工程,2004,硕士.
[16]叶曦.基于家庭生命周期金融资产决策模型研究[D].大连理工大学,金融管理,2013,硕士.
[17]徐浩.新型杂原子分子筛的合成与表征[D].华东师范大学,物理化学,2014,博士.
[18]马凡.智能视频监控中的背景建模算法研究[D].华中科技大学,模式识别与智能系统,2013,硕士.
[19]于璐.草坪草降雨截留的生态水文效应研究[D].北京林业大学,草学,2013,硕士.
[20]董力方.地理教师兼职班主任对学生有效学习的影响研究[D].河北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[21]杨序斌.暴力视频游戏对个体共情及亲社会行为倾向的影响[D].湖南师范大学,应用心理学,2014,硕士.
[22]佘丛国,席酉民.国内外管理科学与工程研究热点的比较分析[J].科学学研究,2002,04:406-410.
[23]白石柱.无牙上颌骨缺损种植修复优化设计的三维有限元分析[D].第四军医大学,2004.
[24]黄玲.Profibus现场总线及其在直流输电系统中应用研究[D].西北工业大学,电力电子及电力传动,2004,硕士.
[25]胡峻铭.基于网络的高校体育信息系统分析与设计研究[D].湖北工业大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[26]吴能平.宁波专业外贸公司转型升级研究[D].浙江工业大学,2012.
[27]肖瑶.成都市H村农民政治参与研究[D].西南交通大学,行政管理,2014,硕士.
[28]张艺菲.英汉政治演讲语篇修辞模式对比研究[D].东北师范大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[29]王涛.发形霞水母触手提取物致红细胞与NRK-52E细胞损伤机制[D].第二军医大学,军事预防医学,2013,硕士.
[30]李慎安.国际单位制中的辅助单位[J].机械工程.1985(04)
[31]吴欣伟.吉大校园移动通信网络投资项目效益研究[D].吉林大学,工商管理,2013,硕士.
[32]王欣.辽墓与五代十国墓的布局、装饰、葬具的共性研究[D].吉林大学,考古学及博物馆学,2013,硕士.
[33]刘晓蕾.肺癌EGFR基因突变检测方法的建立及临床应用[D].辽宁医学院,临床检验诊断学,2012,硕士.
[34]孟慧.高管薪酬、业绩敏感性与内部控制有效性研究[D].北京交通大学,2014.
[35]潮兴兵.初中物理教材内容结构比较及其调查研究[D].西南师范大学,2004.
[36]杨建国.苏州外资经济发展的理论解释与实证分析[D].苏州大学,农业经济管理,2003,硕士.
[37]黄震.分布式农田信息采集及预测系统研究[D].山东大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[38]张宇.学校品牌建设策略研究[D].华侨大学,项目管理（专业学位）,2013,硕士.
[39]李曙光.DT发电集团集中采购的供应商评价研究[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[40]张腾.石油资源的安全与甲醇汽油的性质研究[D].长安大学,动力机械及工程,2013,硕士.
[41]江瑜.商业银行客户关系管理系统组成方案[J].武汉理工大学学报(信息与管理工程版),2004,03:137-140.
[42]赵波.活性炭结构和表面性质及其负载钌基氨合成催化剂的研究[D].浙江工业大学,工业催化,2004,硕士.
[43]王喆,张进之.热轧张力观测器模型的研究与构建[J].冶金自动化,2005,03:29-32.
[44]孙成禹.谱模拟方法及其在提高地震资料分辨率中的应用[J].石油地球物理勘探,2000,01:29-37.
[45]李晓慧.科研项目负责人胜任力模型研究[D].山东财经大学,企业管理,2014,硕士.
[46]冯新伟.基于“3S”技术的土地利用更新调查方法研究——以偃师市为例[D].河南农业大学,土壤学,2004,硕士.
[47]邵莲芬.栾川县柿树沟沟道泥石流堆积体复活形成机理与预测研究[D].中国地质大学,岩土工程,2014,博士.
[48]玛丽亚.西伯利亚油画风景，伊林内赫艺术[D].内蒙古师范大学,美术学,2013,硕士.
[49]金洋1,王日新2,徐敏强2.基于状态记忆的航天器自主故障诊断方法[J].系统工程与电子技术.
[50]蒋科学.羊群效应检验以及与市场效率的关系研究[D].南京财经大学,金融学,2012,硕士.